Autopsie de l’abeille ouvrière Apis mellifera

Le praticien peut être amené à réaliser une autopsie d’abeille domestique dans le but, par exemple, d’observer Acarapis woodi dans les trachées et de diagnostiquer ainsi la parasitose qui lui est liée, ou encore pour prélever le tube digestif, analyser son contenu et mettre en évidence Nosema, etc. Pratiquer une autopsie d’abeille n’est pas facile, mais, avec un peu de rigueur et de matériel, c’est à la portée de tout vétérinaire.

Matériel et produits nécessaires

Le praticien a besoin du matériel et des produits suivants :

- une loupe binoculaire de bonne qualité ou un microscope optique destiné aux dissections, équipés, l’un comme l’autre, d’une source lumineuse. En général, l’image doit être grossie 20 fois ;

- une paire de ciseaux fins à cuticule de 9 mm de long, bien aiguisés pour couper proprement les tissus plus durs ;

- une pointe aiguisée avec un manche ;

- un scalpel avec une lame pointue n° 3 ;

- quelques pipettes Pasteur ;

- des pinces fines à bouts pointus et à mors plats ;

- de la cire ou de la paraffine pour fixer l’abeille, ou encore, pour aller plus vite, de la colle forte à base d’éthyle de cyanoacrylate à prise rapide.

- quelques plateaux à dissection réalisés dans des boîtes métalliques d’environ 8 cm de diamètre. Ils doivent pouvoir accueillir la cire fondue. Selon la température de celle-ci, les boîtes en matière plastique peuvent convenir aussi. Avec la méthode qui consiste à fixer l’insecte à la colle forte, des boîtes de Petri sont suffisantes ;

- de l’alcool dénaturé à 90°, qui sera dilué (30 % alcool, 70 % eau, sachant qu’un mélange 50/50 fonctionne également) ;

- un liquide de fixation (du commerce) ;

- une substance permettant de sacrifier les abeilles (soufre) ou de quoi les mettre dans le froid ;

- de nombreux autres produits peuvent être nécessaires en fonction du travail à réaliser, en particulier des géloses ou des liquides de culture pour bactériologie, de la paraffine et des colorants pour les lames destinées aux études histologiques.

Préparation des abeilles

Les abeilles doivent être fraîches et récemment sacrifiées. La taille des reines et des mâles rend plus facile la manipulation. C’est sur eux seuls que les organes reproducteurs pourront être observés.

Les abeilles tuées sont plongées dans de l’alcool auquel du formol et de l’eau sont ajoutés afin d’empêcher la décomposition. Le mélange comporte 70 % d’alcool à 90 °C, 5 % de formol et 25 % d’eau. Le formol pénètre rapidement et durcit les tissus mous.

Montage

Les abeilles sont placées le ventre contre le fond de la boîte. Les ailes, les pattes et le proboscis sont coupés avec les ciseaux. L’insecte est ensuite essuyé avec un papier buvard. À l’aide de l’anse chauffée, prendre un peu de cire et la placer sur la boîte métallique (ou en plastique dur). Déposer l’abeille en commençant par son abdomen. Mettre de la cire sur les côtés de l’insecte pour bien le fixer. Il doit être à demi enfoui dans la préparation pour ne pas bouger lors de la dissection. Laisser refroidir un peu, puis verser le liquide de dissection de manière à recouvrir l’abeille. Placer le plateau sous le microscope. Le montage est alors prêt pour l’autopsie.

Une technique simplifiée consiste à simplement coller l’abeille avec une colle à based’éthyle de cyanoacrylate sur le fond d’une boîte de Pétri. Verser ensuite le liquide de dissection sur l’insecte. Un point à retenir avec l’une ou l’autre des deux méthodes de fixation au plateau : l’insecte doit être bien recouvert, sinon il se forme des reflets lumineux gênants à la vision à travers la loupe ou le microscope.

Dissection

La dissection commence par l’abdomen, se poursuit avec le thorax, pour terminer avec la tête. Les débris de dissection sont chassés avec un peu de liquide envoyé à l’aide de la pipette (ou d’une pissette).

L’abdomen

Incérer la pointe des ciseaux sous un tergite situé à droite du corps. Couper la paroi et continuer à ouvrir sur tout le côté droit de l’abdomen. Relier les deux traits de coupe. Tourner le plateau pour faire de même à gauche. Soulever le plastron délicatement pour découvrir les organes abdominaux. L’observation dela face interne du plastron peut se faire, puis celle des organes :

- le cœur et les cellules graisseuses,

- les muscles abdominaux,

- le rectum (plein ou vide, selon l’activité de l’abeille),

- l’intestin grêle,

- les tubes de Malpighi,

- les trachées (tubes argentés).

À l’aide d’une aiguille placée sous le rectum et le ventricule, soulever le tube digestif. Sont alors visibles l’intestin grêle, le ventricule, le pylore, le proventricule, l’œsophage qui entre dans le thorax. Couper l’œsophage et le rectum, enlever le tube digestif. Les ganglions sont apparents. Retirer le diaphragme. Le dernier ganglion est relié à l’appareil vulnérant qui peut être observé. Les muscles abdominaux sont dégagés. Sur les reines (et quelques ouvrières) apparaissent les ovaires.

Le thorax

L’observation des muscles chez une abeille fraîche qui n’est pas maintenue en place est quasi-impossible car ils sont souples et élastiques. Il est nécessaire de fixer les tissus de l’abeille pour bien les apercevoir. À l’aide du scalpel, sectionner longitudinalement et dans son milieu le toit du thorax qui est fermement attaché aux muscles du vol. Il convient de s’aider de la lame pour permettre de le séparer des muscles. Effectuer alors des mouvements droite-gauche pour les dissocier. La cuticule est ensuite coupée pour la détacher des muscles. Réaliser la même opération avec l’autre demi-cuticule du thorax.

Retirer ensuite les muscles à l’aide d’une pince, observez alors l’œsophage qui traverse le thorax. Les glandes salivaires et l’aorte sont également visibles. Enfin, le système nerveux thoracique est mis en évidence.

La tête

Couper avec les ciseaux pour retirer la cuticule située entre le proboscis, les yeux et le haut du front. Les rétines pourpres des trois ocelles sont visibles. Élargir en coupant une partie des yeux composés. Après avoir retiré un grand sac trachéal, il est possible d’examiner le cerveau, les lobes optiques reliés aux yeux, les glandes hypopharyngiennes en avant du cerveau, l’hypopharynx. Retirer les glandes pour découvrir les glandes mandibulaires. Agrandir l’ouverture jusqu’aux antennes, remarquez leurs lobes et leurs nerfs.

Les organes génitaux

Les organes génitaux sont observés chez la reine ou les mâles. Il convient de procéder de la même manière. Il est aussi possible d’effectuer des coupes transversales des insectes pour mieux comprendre les relations entre les différents organes.
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