Optimisation du diagnostic du botulisme aviaire

Une méthode alternative pour le diagnostic du botulisme aviaire, dû à l’action de la toxine botulique produite par Clostridium botulinum, a été mise au point.

La méthode de référence pour le diagnostic du botulisme aviaire consiste en un test de létalité sur souris à partir des sérums et des contenus intestinaux, et en la détection des gènes codant pour les toxines C, D, C/D, D/C par polymerase chain reaction (PCR) en temps réel, après enrichissement à 37 °C pendant au moins 48 heures en anaérobie d’un pool de contenus intestinaux.

L’approche alternative consiste en la détection des gènes codant pour les toxines C, D, C/D, D/C et E par PCR en temps réel, après enrichissement à 37 °C pendant au moins 48 heures en anaérobie des foies, des rates et des écouvillons cloacaux, suivie par une extraction d’ADN.

Le résultat montre qu’avec la méthode alternative, la confirmation de suspicion chez les animaux présentant des symptômes cliniques est améliorée de plus de 50 % par rapport à l’analyse par PCR en temps réel des intestins et de plus de 20 % par rapport au test de létalité sur souris. Parmi les diagnostics établis, 86 % des foies sont positifs, de même que 70 % des rates et 62 % des écouvillons cloacaux. Ainsi, le foie apparaît comme le prélèvement le plus sensible pour la détection de C. botulinum par PCR en temps réel. Les auteurs recommandent cette nouvelle méthode pour confirmer une suspicion de botulisme aviaire (en pratique, l’analyse des foies de cinq animaux permet d’établir le diagnostic).

La détection de C. botulinum par PCR en temps réel peut s’appliquer à tout type de prélèvement. Une optimisation de l’étape d’extraction d’ADN via la comparaison de quatre kits commerciaux a permis d’améliorer la sensibilité de la méthode pour l’analyse des prélèvements d’environnement. Le kit retenu (PowerSoil^® DNA Isolation Kit) permet en effet d’éliminer les inhibiteurs de PCR dans la plus grande partie des échantillons. Les auteurs recommandent son utilisation.
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